作为FL生产原料的萤火虫,要依靠人工捕捉或养殖,受地域和季节性限制,且该生物生产周期长、养殖成本高、提取的酶成分复杂,随着分子生物学的发展,人们转向用基因工程的方法进行生产。1985年,deWet,J.R.等克隆了P.Pyralis的FL基因,并在大肠杆菌(Escherichiacoli)中表达,从中得到具有活性的FL。1986年,他们测定了FL基因的cDNA序列。随后,各种发光甲虫的FL基因相继克隆成功,并能在原核和真核表达系统中表达。取自P.Pyralis长约1.8kb的cDNA基因在E.coli表达的产物是分子量为6Chemicalbook2kD,含550个氨基酸的多肽链,与自然提取得到的FL相比,具有同样的反应动力学特性和发射波长,在相同的反应条件下酶的稳定性亦无差异。萤火虫荧光素酶基因通过克隆在E.coli表达,转化体在37℃、LB培养基中生长到对数后期收集菌体,用渗透压法、冻融法提取细菌胞质组分,经均质、离心,用凝胶排阻、离子交换色谱提取纯酶,冷冻干燥保存。BL可从培养发光细菌直接提取得到,其制备方法与FL类似。从V.harveyi中提取的酶活可达1.8×1011LU/mg,为获得特殊用途的BL,亦可通过诱变或基因克隆得到。各种发光细菌的基因克隆均有许多报道。
生物活性
Luciferase, firefly 是一种发光酶,负责萤火虫和磕头虫的生物发光。